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<title>Nested PCR</title>
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<h1 id="firstHeading" class="firstHeading mw-first-heading"><span class="mw-page-title-main">Nested PCR</span></h1>
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<p>Die <b>nested PCR</b> (dt. ‚genestete PCR‘) ist eine Variante der <a href="Polymerasekettenreaktion" class="mw-redirect" title="Polymerasekettenreaktion">Polymerasekettenreaktion</a> zur stärkeren Vermeidung von unerwünschten PCR-Produkten.<sup id="cite_ref-Pelt-VerkuilBelkum2008_1-0" class="reference"><a href="#cite_note-Pelt-VerkuilBelkum2008-1"><span class="cite-bracket">[</span>1<span class="cite-bracket">]</span></a></sup>
</p>
<div class="mw-heading mw-heading2"><h2 id="Eigenschaften">Eigenschaften</h2></div>
<p>Die nested PCR besteht aus zwei aufeinanderfolgenden PCR mit unterschiedlichen <a href="Primer" title="Primer">Primerpaaren</a> in beiden Reaktionen. Durch die Verwendung zweier unterschiedlicher Primerpaare wird die Wahrscheinlichkeit unspezifischer Bindung von Primern und daraus folgender <a href="Amplifikation_(Genetik)" title="Amplifikation (Genetik)">Amplifikation</a> unerwünschter <a href="DNA-Sequenz" class="mw-redirect" title="DNA-Sequenz">DNA-Sequenzen</a> gesenkt, denn nur Sequenzen, die Bindungsstellen für jeweils beide Primer auf jedem Strang besitzen werden in beiden Reaktionen vermehrt. Die nested PCR wird verwendet, um die <a href="Spezifit%C3%A4t" class="mw-redirect" title="Spezifität">Spezifität</a> der Amplifikation bei geringer Templatekonzentration oder in komplexen DNA-Mischungen zu erhöhen.<sup id="cite_ref-PMID7920237_2-0" class="reference"><a href="#cite_note-PMID7920237-2"><span class="cite-bracket">[</span>2<span class="cite-bracket">]</span></a></sup> Die erste PCR wird mit außenliegenden Primerpaaren durchgeführt. Ein kleiner Teil des Produkts der ersten Reaktion wird als Vorlage für die zweite PCR mit den innenliegenden Primerpaaren weiterverwendet. Durch die hohe Zahl an Amplifikationszyklen in beiden PCR hat die Methode eine sehr hohe <a href="Sensitivit%C3%A4t_(Test)" class="mw-redirect" title="Sensitivität (Test)">Sensitivität</a>, aber die doppelte Reaktion erhöht auch die Möglichkeiten für das Einbringen von <a href="Kontamination_(Medizin)" title="Kontamination (Medizin)">Kontaminationen</a>.<sup id="cite_ref-3" class="reference"><a href="#cite_note-3"><span class="cite-bracket">[</span>3<span class="cite-bracket">]</span></a></sup> Wenn nur ein Primer für einen der Stränge verwendet wird, aber zwei (ein äußerer und ein innerer) für den anderen Strang, dann wird die Reaktion als <i>semi-nested PCR</i> bezeichnet.<sup id="cite_ref-4" class="reference"><a href="#cite_note-4"><span class="cite-bracket">[</span>4<span class="cite-bracket">]</span></a></sup>
</p>
<div class="mw-heading mw-heading2"><h2 id="Geschichte">Geschichte</h2></div>
<p>Die nested PCR wurde erstmals 1993 von Nuanthip Kamolvarin und Kollegen zum Nachweis des <a href="Tollwutvirus" class="mw-redirect" title="Tollwutvirus">Tollwutvirus</a> veröffentlicht.<sup id="cite_ref-5" class="reference"><a href="#cite_note-5"><span class="cite-bracket">[</span>5<span class="cite-bracket">]</span></a></sup>
</p>
<div class="mw-heading mw-heading2"><h2 id="Einzelnachweise">Einzelnachweise</h2></div>
<ol class="references">
<li id="cite_note-Pelt-VerkuilBelkum2008-1"><span class="mw-cite-backlink"><a href="#cite_ref-Pelt-VerkuilBelkum2008_1-0">↑</a></span> <span class="reference-text"><span class="book">Elizabeth van Pelt-Verkuil, Alex van Belkum, John P. Hays: <cite style="font-style:italic">Principles and Technical Aspects of PCR Amplification</cite>. Springer Science & Business Media, 2008, ISBN 978-1-4020-6241-4, <span style="white-space:nowrap">S.<span style="display:inline-block;width:.2em"> </span>190–</span> (<a rel="nofollow" class="external text" href="https://books.google.com/books?id=-AMuhy2Nwb0C&pg=PA190">google.com</a>).<span class="Z3988" title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Abook&rfr_id=info:sid/de.wikipedia.org:Nested+PCR&rft.au=Elizabeth+van+Pelt-Verkuil%2C%26%2332%3BAlex+van+Belkum%2C%26%2332%3BJohn+P.+Hays&rft.btitle=Principles+and+Technical+Aspects+of+PCR+Amplification&rft.date=2008-03-14&rft.genre=book&rft.isbn=9781402062414&rft.pages=190-&rft.pub=Springer+Science+%26+Business+Media" style="display:none"> </span></span></span>
</li>
<li id="cite_note-PMID7920237-2"><span class="mw-cite-backlink"><a href="#cite_ref-PMID7920237_2-0">↑</a></span> <span class="reference-text">L. A. Haff: <i>Improved quantitative PCR using nested primers.</i> In: <i>PCR methods and applications.</i> Band 3, Nummer 6, Juni 1994, S. 332–337, <a href="Digital_Object_Identifier" title="Digital Object Identifier">doi</a>:<span class="uri-handle" style="white-space:nowrap"><a rel="nofollow" class="external text" href="https://doi.org/10.1101/gr.3.6.332">10.1101/gr.3.6.332</a></span>, <a class="external mw-magiclink-pmid" rel="nofollow" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7920237?dopt=Abstract">PMID 7920237</a>.</span>
</li>
<li id="cite_note-3"><span class="mw-cite-backlink"><a href="#cite_ref-3">↑</a></span> <span class="reference-text">Peter Kimmig, Heinrich K. Geiss, Birgid Neumeister, Rüdiger Braun: <i>Mikrobiologische Diagnostik: Bakteriologie - Mykologie - Virologie - Parasitologie.</i> Thieme, 2009. ISBN 978-3-1315-7-9423. S. 234.</span>
</li>
<li id="cite_note-4"><span class="mw-cite-backlink"><a href="#cite_ref-4">↑</a></span> <span class="reference-text">Ralph Rapley, John M. Walker: <i>Molecular Biology and Biotechnology</i>. Royal Society of Chemistry, 2009. ISBN 978-0-8540-4-1251. S. 83.</span>
</li>
<li id="cite_note-5"><span class="mw-cite-backlink"><a href="#cite_ref-5">↑</a></span> <span class="reference-text">Nuanthip Kamolvarin, Thaweesak Tirawatnpong, Ratree Rattanasiwamoke, Suranan Tirawatnpong, Taweeporn Panpanich, Thiravat Hemachudha: <i>Diagnosis of Rabies by Polymerase Chain Reaction with Nested Primers</i>, In: <i>The Journal of Infectious Diseases</i>, Band 167, Heft 1, 1993, S. 207–210, <a href="https://doi.org/10.1093/infdis/167.1.207" class="extiw external" title="doi:10.1093/infdis/167.1.207">doi:10.1093/infdis/167.1.207</a>.</span>
</li>
</ol></div><!--htdig_noindex--><div><div class="zim-footer">
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